Hvis Quattrocento var præget af en flerhed af kunstneriske centre, i spidsen for det florentinske "store værksted", blev Rom i det næste århundrede det vigtigste centrum. Samtidig udvikler et andet kunstcenter, som i fremtiden vil blive meget indflydelsesrig: Venedig.
Men i de første tyve år af Cinquecento var Firenze stadig kunsthovedstaden. Det var der, Raphael arbejdede, som kom for at studere Leonardos, Michelangelos og Fra Bartolommeos arbejde såvel som for at forstå finesserne i anatomi, teknikken til lys og sentimental udtryk. Under sit ophold i Firenze malede han adskillige Madonnas, herunder en smuk gartner fuld af ømhed. Han blev indkaldt til Rom af pave Julius II i 1508 og modtog en ordre om at male de personlige pavelige rum (strofer) i Vatikanets palads, som var begyndelsen på hans intensive arbejde i forbindelse med Holy See.
Ud over disse værker, hvis udførelse han skaber sit eget værksted, er kunstneren engageret i staffelimaleri, især skriver han St. Michael, bestilt af Lorenzo Medici som en gave til Francis I. I dag er dette maleri en del af Louvre-samlingen samt en anden - en lille - St. Michael og St. George, sandsynligvis skrevet til hertugen af Montefeltre.
Raphaels børster tilhører desuden flere påfaldende sande portrætter, for eksempel portrættet af Baldassare Castiglione. I tre århundreder var Raphaels arbejde ekstremt populært, også i Frankrig. Oprettelsen af legenden omkring hans navn blev delvist lettet af mesterens pludselige død i en alder af syvogtredive.
